Hoe te Agarplaten Voorbereiden

Moleculaire biologie en bacteriologie gebruik agar platen om cultuur micro-organismen zoals bacteriën voor experimenten. De agar is het middel dat stolt of gels , een vloeibaar voedingsmedium die door het micro-organisme om te overleven en te groeien . Eenmaal overgebracht naar een agar plaat , de bacteriën groeien in verschillende kolonies ( indien gekweekt bij lage concentraties ) of vlekken ( als je ze in hoge concentraties ) en kan voor analyse worden geoogst . Biologen bereiden agar -platen , als het proces toegang tot laboratorium -grade reagentia en machines en een goed begrip van de moleculaire biologie en steriele technieken vereist . Wat je nodig hebt
Handschoenen
Labjas
Gezichtsmasker
bunsenbrander
laminaire stroming kap
Steriele petrischaaltjes
10g Bacto - trypton
5g gistextract
15g agarose
1 ml 1N NaOH
steriel gedestilleerd water of Glass fles en autoclaaf tape
autoclaaf Supplementen , bijv. antibiotica, zoals ampicilline
Toon meer instructies
1

Trek van aangepaste veiligheidsuitrusting, inclusief handschoenen, een laboratoriumjas en een gezichtsmasker en ontsmet alle oppervlakken . Werk naast een Bunsen brander of , bij voorkeur , in een steriele laminaire stroming kap . Dit voorkomt dat verontreinigingen in de lucht van het vallen in de agar . Kopen van 2

Verwijder de stapel petrischaaltjes uit hun verpakking , maar sparen voor opnieuw inpakken van de agar platen . Label het buitenoppervlak van de schaal ( niet het deksel ) met het soort agar en de datum van vervaardiging . Leg de platen uit als een enkele laag met de deksels verwijderd om het gieten van de agar makkelijker .

Meng 3 de bacto - trypton , gistextract en agarose elkaar en voeg de natriumhydroxide ( NaOH) . Voeg steriel gedestilleerd water tot 1 liter voedingsbodems verkrijgen . Breng deze oplossing over een glazen fles met minstens 1.5L volume. Losjes schroef op het deksel van de fles en het etiket van de datum van vervaardiging en de naam van de media . Plak een strook autoclaaf tape op de fles en autoclaaf het voor 25 minuten . Laat de fles afkoelen tot minimaal 45 graden Celsius ( of het voortijdig uitharden ), maar niet hoger dan 50 graden Celsius . U kunt flessen gekoeld bewaren en gestold agar bij 4 graden Celsius en vervolgens warm tot vloeibaar . Indien nodig voor uw specifieke experiment of stam van bacteriën , voeg de juiste soort en hoeveelheid supplement zoals antibiotica . Als de media is te heet , zal de supplementen worden vernietigd , zo zorgvuldig controleert de temperatuur van de media voordat verder gaat.
4

Giet een voldoende volume van agar half vullen het gerecht , terwijl de agar is nog warm en vloeibaar . Zorg ervoor dat het oppervlak volledig bedekt . Giet een te hoog bedrag of laat de agar bereikt de top van de schotel. Houd de platen in een steriele sfeer doordat de bunsenbrander of laminaire stroming kap om continu draaien . Laat de platen om en vervang de deksels .
5

Droog de agarplaten gedurende ongeveer 30 minuten tot een uur in een oven, ingesteld niet hoger dan 37 graden Celsius . U kunt ze achterlaten in de laminaire stroming kap drie minuten of op een gedecontamineerd laboratorium bank in een gebied met weinig verkeer , dat is niet tochtig voor een dag of twee . Het drogen van de platen voorkomen dat eventuele bacteriële oplossing van gewoon verdunnen uit en glijden in plaats van het vormen van kolonies die zich aan de agar geplaatst op het agar oppervlak .

Bewaart 6 voorzichtig de platen in het donker bij 4 graden Celsius. Stapel de gedroogde agar platen met hun billen omhoog zodat u duidelijk de labels en micro-organismen en puin kan vallen op het agar oppervlak en besmetten hen. Zet de gerechten terug in hun verpakking , dek af met aluminiumfolie en tape de verpakking dicht. Label de vol platen met hun inhoud en de datum van de bereiding . U kunt de platen op te slaan voor maximaal twee maanden en moet hen gooi deze na dat .