Intracellulaire kleuringsprotocol voor flowcytometrie

Flow cytometrie is een tool die nuttig is in de studie van cel eiwitten . Het maakt gebruik van de lichtemissie of fluorescentie van de eiwitten in de cel . Antilichamen of probes gelabeld met fluorescentie worden gebruikt om specifieke proteïnen . Flowcytometrie wordt gebruikt om een ​​aantal ziekten , waaronder kanker te diagnostiseren , maar is ook nuttig bij medisch onderzoek . Vaststelling Cellen

cellen moeten worden vastgesteld om de stabiliteit van de intracellulaire eiwitten behouden . Een aantal fixatieven kunnen worden gebruikt, zoals formaldehyde of ijskoude aceton . Na fixatie , het celmembraan moet permealized zodat het antilichaam aan de cel . Detergentia zoals Triton of NP - 40 , kan of ijs - koude methanol wordt gebruikt om gaten te maken in de celmembraan .
Kleuring

wassen cellen in de blokkerende buffer 0,5 procent runderserumalbumine verdund in fosfaat gebufferde zoutoplossing , BSA /PBS . Cellen worden geïncubeerd in blockingbuffer specifieke binding te verminderen . Voeg primair antilichaam verdund in blokkerende buffer en laat incuberen bij kamertemperatuur , voor optimale tijdsduur . Wassen met blokkerende buffer .
Analyse

Incubeer de secundaire antilichaam, dat is gelabeld met een fluorescerend label , bij kamertemperatuur gedurende 30 minuten . Om ongebonden antilichaam wassen cellen in het blokkeren van buffer te verwijderen . Spin cellen tot een pellet en vervolgens opnieuw in suspensie in PBS en te analyseren op stromingscytometer .