Chlooramfenicol Plate Bereiding

Chlooramfenicol is een breed - spectrum antibioticum dat bacteriële microben doodt door te interfereren met hun vermogen om te repliceren . Deze antibiotica werd aanvankelijk ontwikkeld om infecties bij mensen te bestrijden , maar volgens Drug.com , is het alleen nu gebruikt , aangezien deze publicatie , als laatste redmiddel wanneer andere geneesmiddelen niet werken vanwege ernstige bijwerkingen zoals aplastische anemie , hypoplastische anemie, trombocytopenie en granulocytopenie . Chlooramfenicol is nuttig in een research laboratorium voor moleculaire biologie experimenten . Wanneer chlooramfenicol is opgesteld op een plaat kan worden gebruikt om bacteriële concentratie detecteren of bepaalde stammen van bacteriën voor verdere experimenten isoleren . Wat je nodig hebt
Gedistilleerd water
Chlooramphenicol
1,0 procent tryptone
0,5 procent gistextract
1,0 procent natriumchloride ( NaCl ) pH 7,0
95 procent ethanol
Agar
2 - liter kolf
magnetische roerplaat
Middelgrote magnetische roerstaaf
latex of nitril handschoenen
laboratoriumschaal
autoclaaf 30 steriele 10 cm platen
blauwe markeerstift
Parafilm
aluminiumfolie
Autoclaaf tape
Toon meer instructies
1

Zet op een paar latex of nitril handschoenen om de LB-bouillon te bereiden . LB bouillon is een gemeenschappelijke afkorting voor lysogenie bouillon of Luria bouillon , en het is zo gebruikt als kweekmedia voor het kweken van bacteriën. Het kan worden gemaakt vanaf het begin in het laboratorium , of om tijd te besparen kan worden gekocht van een moleculaire biologie voorraad leverancier .

Plaats Pagina 2 een vel papier met een gewicht op de schaal. Druk op de knop op nul zetten op de schaal zodat het gewicht van het papier niet is opgenomen in het uiteindelijke gewicht . Voeg kleine hoeveelheden trypton per keer , totdat de u 10 g bereikt . Vouw vervolgens de wegen papier in de helft met de tryptone in het centrum. Pak de wegen papier en zorgvuldig gebruik van de gevouwen papier als een trechter om de tryptone toe te voegen aan de 2 L kolf. Volg deze procedure om 5 g gistextract , 10 g NaCl en 15 g agar wegen .

Drop 3 het roerstaafje in de kolf en centreren de kolf op de magnetische roerplaat . Voeg genoeg gedestilleerd water aan de oplossing tot 1 liter brengen .
4

Draai het roer plaat op , en kijken naar de roerstaaf . De plaat moet worden vastgesteld op de juiste snelheid om de roerstaaf te bewegen in een matig tempo , zonder vast komen te zitten aan de zijkanten van de kolf . Pas de instellingen indien nodig. Laat de oplossing te zitten op de plaat totdat alle reagentia zijn opgelost .
5

Schakel de roerplaat en strek een 3 -inch vierkant stuk parafilm over de bovenkant van de kolf , om dekken en de kolf te beschermen tegen eventuele verontreinigingen of morsen . Dek de parafilm met een stuk aluminiumfolie en voeg een stuk markering autoclaaf tape bovenop de folie .

Plaats
6 de oplossing in een autoclaaf op vloeistof cyclus gedurende 20 minuten bij 15 psi tot steriliseren .
7

Neem de kolf uit de autoclaaf . Het zal zeer heet zijn. Laat de oplossing afkoelen tot ongeveer 55 graden celsius , door het te laten zitten bij kamertemperatuur , of door het plaatsen van de kolf in een 65 - graden celsius waterbad .

Spray
8 en vegen van het werk oppervlakte met 95 procent ethanol om besmetting te voorkomen . Het is ook een goed idee om je handschoenen te veranderen voordat u de platen .
9

Mark de kant en het deksel van elke plaat met verticale blauwe band met de markeerstift . Dit geeft de platen bevatten LB bouillon en chlooramfenicol .
10

Voeg genoeg chlooramfenicol antibiotica om de oplossing zodat de concentratie bereikt het gewenste bedrag , afhankelijk van de bacteriën je gaat werken met . Een gemeenschappelijke eindconcentratie 100ug/ml . Voor deze concentratie , voeg 1 ml chlooramfenicol voorraad ( op 25mg/ml ) . Schud de kolf in een cirkelvormige beweging , of plaats het terug op de magneet roerplaat gedurende 1-2 minuten om te controleren of het goed gemengd is .
11

Wrijf de monding van de kolf met ethanol , en giet de oplossing in de platen , totdat ze de helft met de oplossing gevuld . Laat de platen uitharden , bedek elk bord met een deksel , en bewaar ze ondersteboven bij 4 graden celsius om te voorkomen dat ze uitdrogen .