Biotinylering Protocols

Biotinylatie is het proces waarbij biotine of vitamine H , een eiwit of andere moleculen . Deze wetenschappelijke procedure wordt meestal gebruikt in de biotechnologie en moleculaire biologie onderzoek met DNA , eiwitten en antigenen , welke moleculen zijn het immuunsysteem van het lichaam herkennen als indringers . Biotinylering protocollen omvatten de biotinylering van antilichamen en peptiden , alsook celoppervlak biotinylering . Biotinylering van antilichamen

biotine verbinden met antilichamen eiwitten als een antigeen in het lichaam , technici natriumbicarbonaat ( NaHC03 ) bij pH 9 , dimethylsulfoxide ( DMSO ) ;

NHS - biotine en een zoutoplossing stof genaamd PBS . Monsters worden gemengd met natriumbicarbonaat , die later wordt toegevoegd aan NHS - biotine in DMSO . De oplossing wordt vervolgens de geanalyseerde antilichamen toegevoegd en geïncubeerd op een apparaat genoemd een rotator gedurende vier uur bij kamertemperatuur of overnacht bij 39,2 graden Fahrenheit . Ten slotte wordt de oplossing verdund met PBS .
Celoppervlak Biotinylering

het celoppervlak biotinylering protocol technici weefselkweek , fosfaat gebufferde zoutoplossing ( PBS ) en pH 7,4 en sulfosuccinimidyl - 2 - ( biotinamido ) ethyl - 1 ,3 - dithiopropionaat bufferoplossing zuurgraad die aminogroepen en Tris-Cl balans volgens Current Protocols in Protein science.The cellen gemengd met biotine en bufferoplossing , gedecanteerd en gecentrifugeerd . Stevige inhoud en specifieke eiwitten worden later geanalyseerd op een gel elektroforese plaat.
Biotinylatie van peptiden

Om de biotinylatie van peptiden uit te voeren , het gebruikte reagens is NHS SS - biotine , volgens Philip Shepherd in " monoklonale antilichamen : . A Practical Approach " Peptiden zijn korte fragmenten van aminozuren , de moleculen die eiwitten en DNA vormen . In dit protocol wordt de commerciële oplossing NHS -SS Biotine opgelost in water . Dan is de peptide monster wordt toegevoegd, samen met natriumbicarbonaat om de zuurgraad of pH evenwicht . De oplossing wordt vervolgens geïncubeerd op ijs gedurende twee uur . Technici kunnen het monster waarnemen met of zonder de biotinemoleculen .