Plaque Testmethoden

Assay is een techniek voor het isoleren en zuiveren van virussen en virale titers ( de laagste concentratie virus die resulteert in infectie) bepalen . Een plaque assay , oorspronkelijk genaamd een virologische test is ontwikkeld voor het meten en tellen de besmettelijkheid van bacteriofagen . Volgens Biology - Online.org werd later ook toegepast op zoogdiervirussen tellen . De feiten

Een plaquette is een samenvloeiing , monolaagcultuur van cellen. Het vormt als gevolg van infectie van een van de cellen door een virusdeeltje volgens Biology - Online.org . Wanneer de cel is geïnfecteerd , het virus repliceert en uiteindelijk de cel doodt . Bovendien is de nieuwe gerepliceerde virusdeeltjes verspreiden , infecteren en doden van de nabijgelegen cellen .
Functie

In een plaque assay , is de cultuur eerst gekleurd met een bepaalde kleurstof . Deze dobbelsteen vlekken enige haalbare ( live) cellen , volgens Biologie - Online.org . Hierdoor dode cellen blijken niet gekleurd in de kweek tegen de gekleurde achtergrond. Momenteel wordt de plaque assay toegepast op cellen die antilichamen die erytrocyten vernietigen door hemolyse veroorzaken detecteren .
Functies

erytrocyten zijn cellen (ook wel rode bloedcellen ) een hemoglobine en transporteren zuurstof en kooldioxide in het bloed bevatten , van longen en weefsels . Hemolyse optreedt wanneer erytrocyten open te breken en laat hemoglobine , volgens Biologie - Online.org . Dientengevolge , in de plaque assay basis duidelijk plaque en geeft aan dat de rode bloedcellen werden gehemolyseerd door de antilichamen .
Werkwijze Deel I

Tien - voudige verdunningen van een virus voorraad bereid voorafgaand aan het uitvoeren van een plaque assay en 0,1 ml aliquiots zijn op te maken aan de celmonolagen . Dit mengsel wordt gedurende een tijdsperiode , zodat het virus tijd om de cellen aan te vallen . Bovendien worden de monolagen onder een voedingsmedium dat een stof ( gewoonlijk agar ) bevat , volgens " Detecting Virussen : Een plaque assay " van Vincent Racaniello . De voedingsbodem vormt een gel en na de kweek wordt geïncubeerd , de oorspronkelijke geïnfecteerde cellen los virale nageslacht . De gel beperken de verspreiding van het virus naar omringende cellen , en daardoor het infectueuze deeltjes produceert een cirkelvormig gebied genaamd plaque . Met de tijd , de plaque groeit om een ​​formaat met het blote oog en pigmenten worden gebruikt om de weergave te verbeteren .
Werkwijze Deel II

De virustiter wordt berekend plaque vormende eenheden , genoemd PFU per milliliter . Deze worden geteld en in minimale fout alleen platen die tussen 10 en 100 plaques geteld . Bovendien , volgens " Het opsporen Virussen : Een plaque assay , " voor elke 100 geteld plaques dezelfde titer is afhankelijk van plus of min 10 procent . Daarom is de geschatte fout van een plaque assay is ongeveer 10 procent , wanneer correct uitgevoerd .