NBT testprotocollen

NBT of nitroblauwtetrazolium is een chemische verbinding die in biochemie en immunologie voor het detecteren van het enzym alkalische fosfatase . De stof wordt ook gebruikt bij de diagnosetest van chronische granulomateuze ziekte, die de immunodefense cellen beïnvloedt. NBT -test protocollen omvatten immunoblotten , BCIP /NBT alkalischefosfatasesubstraat oplossing en detectie van galactosidase en alkalische fosfatase activiteiten in weefsel . Immunoblotting

Immunoblotting is een techniek die gebruikt wordt om antilichamen , welke eiwitten betrokken zijn bij het immunodefense proces zijn te detecteren , zegt Susan R. Haynes in " RNA -eiwit interactie protocollen . " Dit omvat het gebruik van NBT , en runderserumalbumine , primaire antilichamen 9E10 , Comassie kleuroplossing , nitrocellulose membranen Tris base bufferoplossing per ammonium - sulfaat , natriumdodecylsulfaat en met water verzadigde butanol .

BCIP /NBT alkalisch fosfatase -substraatoplossing

technici wordt een oplossing met drie druppels van 1 procent 5 - broom - 4 - chloor - 3 - indolyl fosfaat ( BCIP ) , drie druppels 1,5 procent NBT , twee druppels van de chemische stof Levamisol en alkalische fosfatase ( AP ) buffer bij pH 9,5 , volgens de website IHC wereld . De oplossing wordt vervolgens geïncubeerd bij kamertemperatuur en beschikbaar voor gebruik .
Detectie galactosidase en alkalisch fosfatase activiteiten in weefselengineering

galactosidasen zijn enzymen die breken galactoside molecuul , in de bacterie Escherichia coli en andere organismen . Volgens Protocol Online , tijdens dit protocol , biologen gebruiken rat cel monsters behandeld met PBS-oplossing , glutaaraldehyde en paraformaldyde . Vervolgens zij het ​​broom - chloor - indolyl - galactopyranoside of X - gal reactiebuffer bereiden voor de monsters , met kaliumferrocyanide , magnesiumchloride , natrium deoxycholaat en detergens Nonidet P - 40 . Technici kunnen nitroblauwtetrazolium ( NBT ) in plaats van kaliumferrocyanide gebruiken als een sneller alternatief . Cel monsters worden later waargenomen onder de microscoop .