Problemen voor gelelektroforese

Polyacrylamide gelelektroforese of PAGE , is een techniek gebruikt voor scheiding van organische moleculen in een biologisch monster . Moleculen met een lagere afmetingen en gewicht migreren sneller op een polyacrylamidegel als er een elektrische stroom wordt toegepast . Duidelijke verschillende banden worden algemeen waargenomen na voltooide gel geïncubeerd in een bepaalde vlek . Het is een relatief eenvoudige methode . Kan echter geen banden of banden die smeren of vuil op een probleem in een of meer stappen van de werkwijze . U moet volgen algemene richtlijnen om een ​​gel elektroforese methode oplossen wanneer je resultaten zijn niet zoals verwacht . Wat je nodig hebt
Kwaliteit gehalte bis : acrylamide of prefab platen
Twee glasplaten
Acrylamide : Bis
TBE buffer ( TRIS , Boorzuur , EDTA ) op Twitter Voeding
Upper bufferruimte in Neder bufferruimte
Proteïne van DNA-monster
TEMED
ammoniumpersulfaat
Gel vlek
Toon meer instructies
1

Begin met de laatste stap van gelelektroforese eerste en werk achteruit . Voor gelelektroforese , de laatste stap is de kleuring procedure om monster banden te observeren . Weinig problemen zou eigenlijk optreden tijdens de kleuring procedure . Toch moet poeder vlekken goed opgelost in de geschikte buffer voordat ze worden gebruikt om een ​​gel te kleuren . Vergewissen van de juiste concentratie van de vlek werd gebruikt . Kopen van 2

Controleer de stroomtoevoer . De afwezigheid van bands konden geven de stroom of spanning instelling te hoog was en de proefmonsters gemigreerd uit de gel . Hoge instellingen kunnen ook leiden monstercomponenten te migreren door de gel te snel , waardoor een slechte resolutie en bands die onrein verschijnen . Monsters kunnen niet migreren door de gel als de instelling voeding is laag . Monsters kunnen ook afwijken van de put waar ze werden geladen en niet migreren door de gel .

Controle 3 de vloeistof acrylamide wordt gebruikt om de polyacrylamidegel gegoten . Typisch , het percentage acrylamide gebruikt om een polyacrylamidegel varieert gegoten van 5 tot 15 procent . Monsters uit grotere moleculen worden geladen op een 5 procent gel omdat grote stukken bewegen trager gels met een hoger percentage acrylamide . Kleine moleculen worden geladen op een hoger percentage gel omdat een lage gel concentratie zou kunnen oplossen kleinere monsters .

Controle 4 gebruikte reagentia om de acrylamide polymeriseren . Een polyacrylamide gel wordt gevormd door polymerisatie van een vloeibaar mengsel bestaande uit acrylamide en bisacrylamide . Ammoniumpersulfaat en TEMED toegevoegd aan de acrylamide gelvorming katalyseren . Normaal gesproken moet de acrylamide tekenen van polymerisatie ( gelvorming ) tonen 15 minuten na ammoniumpersulfaat en TEMED werden toegevoegd . Polymerisatie dat te snel plaatsvindt is het gevolg van grote hoeveelheden ammoniumpersulfaat . Te weinig ammoniumpersulfaat kan onvolledige of oneffen polymerisatie veroorzaken .
5

Bevestig de hoeveelheid geladen monsters . Hoge concentraties van monsters kan traag bewegen door de gel en verminderen band resolutie . Een monsterconcentratie dat is laag mag niet worden waargenomen na de gel is gekleurd . Deze vlekken zijn echter beperkt in de minimale hoeveelheid monster dat kan worden afgebeeld als gevolg van een vlek gevoeligheid.
6

Bevestig de kwaliteit van de geladen monsters . Zouten en andere verontreinigingen in een monster kan de beweging van het monster langs de gel . Elektroforese is het gevolg van de elektrische stroom die door een gel die een stroomgeleidende buffer bevat ; hoge zoutconcentraties in de steekproef kan de beweging van deze stroom beïnvloeden door de gel . Je isolatie van een monster moet een zuivering kit die een relatief zuiver monster zal produceren opgenomen .
7

bijdragen literatuur of schriftelijk protocol te bepalen of de juiste PAGE werd gebruikt om het experiment . Het percentage acrylamide in PAGE specifiek is voor de grootte van het te testen monster . De literatuur zou ook specifieke informatie met betrekking tot het opzetten van de voeding en de snelheid van het monster migratie .