Western Blots protocollen

Een Western blots is een soort eiwit blot die wordt gebruikt in de medische , biologische laboratoria en andere wetenschappelijke disciplines dagelijks . Western blots , mits goed uitgevoerd , zijn een manier van het bestuderen van eiwit expressie in weefselmonsters. Omdat er kunnen verschillen in de parameters van elk monster zijn een aantal protocollen die moeten worden gevolgd om nauwkeurige resultaten te verkrijgen . Uitvoeren wast

Na incuberen van de membranen in de antilichaam oplossingen voor voldoende tijd , die varieert afhankelijk van de antilichaamoplossing wordt gebruikt , EnCor Biotechnology dat het membraan drie kamertemperatuur wassen moeten ondergaan TBS . TBS is een oplossing die een bepaalde make-up en pH voor het wassen is . Het membraan moet worden gewassen tussen elke introductie van een nieuw antilichaam oplossing .
Voorbereiden kleuring Mengsel

Volgens WesternBlotting.org , de voorbereiding van de kleuring mengsel onmiddellijk voorafgaand aan de toepassing het aan het lid zal de beste resultaten behalen . Er zijn meerdere soorten kleuringsvloeistoffen , waarvan sommige kunnen worden gekocht en waarvan sommige worden gemengd in het laboratorium . Chemiluminescentie kleuring volgens EnCor Biotechnologie , geeft de informatie per vlek maar ook de duur en vergt een donkere kamer ontwikkelen . Mierikswortel peroxidasekleuring en alkalische fosfatase Blotting zijn andere opties voor kleuring. Ongeacht de gebruikte methode , bereiden van het mengsel net vóór gebruik noodzakelijk .
Toepassing van een buffer

Na aanbrengen van de geselecteerde kleuroplossing , het gebruik een buffer sleutel . In chemiluminescentie kleuring , het toepassen van een acetaat over bovenkant van de kleuring oplossing is protocol , volgens WesternBlotting.org . Horse Radish Peroxidase kleuring vereist het gebruik van een ammonium acetaat buffer om de bruine kleuring te verkrijgen . De buffer gebruikt in alkalisch fosfatase Blotting , die een paarse kleuring product moet maken , is ingewikkelder te maken en kan reeds worden aangeschaft .