Hoe kan ik uitlijnen DNA voor Analyse

? Agarosegelelektroforese is de meest voorkomende methode van visuele DNA-fragment analyse, die technici toelaat om visueel DISCERN DNA-fragmenten op basis van grootte . De agarosegel onderhoudt een magnetisch veld en aangezien DNA een negatieve lading beweegt naar de positieve kant van het magnetisch veld . Kleine DNA -fragmenten gaan sneller door de gel en grotere fragmenten bewegen langzamer . DNA-fragmenten worden gekleurd met een fluorescent intercalatiemiddel bekend ethidiumbromide . Dit maakt de vergelijking van verschillende elektroforese DNA monsters op een gel . Wat je
Agarosegel , 0,7 procent tot 2 procent
Tris - boraat - EDTA ( TBA ) , tris - acetaat - EDTA ( TAE ) , natrium lithiumacetaat ( LA ) , boorzuur (SB ) buffer nodig
Ethidiumbromide
Gel laadkleurstof
gelschaaltje
elektroforese kamer
Handschoenen
beschermende brillen
Pipette
Electroforese kam
Toon meer instructies
Het voorbereiden van een 0,7 procent agarosegel
1

Weeg 0,7 gram agarose poeder en plaats dan in een grote (250 ml ) erlenmeyer. kopen van 2

100ml van een 1X ( normale sterkte) buffer ( TAE , TBE , SB of LB buffer ) aan de erlenmeyer met de agarose poeder.
3

Magnetron of warmte met behulp van een bunsenbrander voor ongeveer een minuut tot de oplossing helder en de agarose is opgelost .
4

Neem de kolf van de warmtebron en laat het afkoelen tot 55 tot 60 graden Celsius .
5

Voeg 1 ul ( microliter ) van ethidiumbromide aan de gekoelde oplossing agarose met een geschikt formaat pipet , gewoonlijk 1 ml . Zwenk de oplossing te mengen .
6

Giet de gel langzaam in de gel lade zodat er geen belvorming tijdens dit proces . Als er geen goed voorzien dammen met de gel lade , gebruik plakband om ze te vormen.

Plaats
7 zorgvuldig een elektroforese kam in de gel , zorgen voor een stevige positie en in de juiste richting . Elektroforese kammen kan sterk afhankelijk van het aantal tanden ze . Laat de gel gedurende ongeveer 25 minuten om
8

Dompel de gel in dezelfde buffer gebruikt om de oplossing te bereiden agaorse - . Dit geval een 1X buffer . Dompel de gel in maximaal 5 ml van het runnen van buffer .
Voorbereiding en laden van DNA in de agarosegel voor Analyse
9

Transfer 5-10 ul van uw monster ( s ) van hun reactie buizen in de frisse buizen. In het geval dat u de gehele reactiemengsel te gebruiken , een nieuwe buis is niet nodig .
10

Voeg 0,2 x beladingsbuffer aan elk van uw vers monster buisjes met je DNA monster voor het laden .

11

Verwijder de elektroforese kam langzaam , zodat je niet de gel breken of maken elke ruimte tussen de onderkant van de gel en de gel lade.
12

toevoegen vijf 12 ul van een geschikte DNA-merker aan het eerste putje door de elektroforese kam . Of een DNA-merker is geschikt is, hangt af van de grootte van de fragmenten die u verwacht van uw monster.
13

Load vijf tot 10 ul van uw monsters in de overige wells en een gelijk bedrag van dezelfde DNA-merker in de finale ook.
14

Plaats de elektroden in de elektroforese kamer door het inpluggen van de draden in de juiste aansluitingen in de kamer en zet de elektrode naar 50 tot 150 V.

15

Laat de gel lopen voor 03:59 uur .
Analyse van de resultaten
16

Haal de gel uit de gel kamer en plaats het ofwel in een UV ruimte voor visuele identificatie , of plaats in een machine die in staat is om een foto van de gel te nemen .
17

Meet de markers afstand van de migratie in hun putten .

18

de afstanden ten opzichte van de grootte van de banden op semilog ruitjespapier Plot en trek een best passende lijn .
19

de afstanden van uw onbekende bands berekenen .

20

de maten van uw onbekende bands Schat door het tekenen van een line-up van de afstand die je onbekende bands die de lijn van de beste pasvorm voldoet .
21

Trek nog een lijn van deze meeting point naar de grootte as.