Western Blot Detectiemethoden

Omdat het aantal HIV -en AIDS-gevallen wereldwijd gestegen , de behoefte aan nauwkeurige hiv-tests werd essentieel . Nu na positieve ELISA HIV-tests , medische professionals gebruiken een Western Blot test om een positieve HIV-infectie te bevestigen. Artsen de diagnose ziekte van Lyme door Western Blot testen ook. De test maakt gebruik van ingewikkelde detectiemethoden : medische hulpverleners moeten bloedmonsters te dragen van een gel naar een membraan om de opsporing te vergemakkelijken . Om daadwerkelijk antilichamen in het membraan te identificeren , werknemers maken gebruik van specifieke enzymen , substraten en /of flurophores . AP Enzyme

alkalische fosfatase ( AP ) is een van de belangrijkste enzymen in Western blot testen . AP heeft een lineaire reactietijd , waardoor het een detectie voordeel boven andere enzymen geeft . Hoe meer tijd een AP reactie moet plaatsvinden , hoe nauwkeuriger de test. Echter, de langere periode pikken andere chemische verbindingen en "achtergrond" ruis , die de resultaten van de test kan scheeftrekken .
HRP Enzyme

Medisch werknemers overwegen mierikswortel peroxidase ( HRP ) superieur aan AP , als gevolg van HRP kleinere formaat, de hoge activiteitsgraad , compatibiliteit met de reactie membraan , betrouwbaarheid , goedkope prijs en ruime beschikbaarheid .
chromogene substraten

Medische professionals beschouwen chromogene substraten beste voor het bekijken van de binnenste membraan reactie van bloed en enzym. Chromogene substraten zijn niet zo gevoelig als andere substraten en hebben de neiging te verdwijnen als de blot droogt . Maar voor een snelle visuele test bevestiging , chromogene substraten een effectieve keuze.
Chemiluminescent Blotting Substrates

Chemiluminescent blotting substraten vereisen een constante reactie voor een geslaagde test . Als het enzym haar werkzaamheden staakt of het substraat is uitgeput , het testresultaat wordt verloren . In een optimale test het testresultaat wordt in een tot 24 uur . Medische werknemers maken gebruik van digitale imaging apparatuur en X - stralen om daadwerkelijk te zien het testresultaat , omdat het blote oog niet kan detecteren .
Flurophores

Als medische hulpverleners niet testen met enzymen en hun substraten , dan gebruik ze flurophore - geconjugeerde antilichamen . De flurophore test vereist minder stappen, maar heeft speciale apparatuur. De test vereist een excitatie lichtbron , die de goede reactie in het membraan veroorzaakt . Flurophores en de verlichting apparatuur zijn duur , maar medische werknemers hebben het voordeel van het gebruik van meerdere flurophores in hetzelfde experiment .