Cell Lysis Protocol voor eiwit isolatie

Kleine eiwitten kunnen synthetisch worden bereid , maar voor vele redenen er geen synthetische machinerie beter dan de cel zelf . Typisch , de eerste stap in eiwit isolatie cellysis . Cel Lysis
In cellysis , het membraan rond de cel scheurt .

Het woord " lysis " komt van een Griekse wortel betekenis " los te maken . " In cellysis , worden de krachten die het celmembraan samen verstoord , waardoor het scheuren . De inhoud van de cel wordt vervolgens vrijgegeven in de omringende oplossing , waaronder het eiwit van belang . Meestal wordt dit gedaan door toevoeging van een chemische oplossing genaamd lysisbuffer .
Voorbereiden Lysis Buffer
De keuze lysisbuffer zal afhangen van het celtype , het eiwit en de toepassing .

Een groot aantal verschillende lysis oplossingen zijn commercieel verkrijgbaar , of gemeenschappelijke recepten kunnen worden gebruikt voor lysis buffer bereiden van gewone chemicaliën . De beste buffer gebruikt zal variëren afhankelijk van het gebruikte celtype , het eiwit te isoleren en de uiteindelijke toepassing , maar in het algemeen een lysis oplossing bevat een detergent molecuul (vaak NP - 40 of Triton - X ) die de cel oplost membraan , samen met buffers , chelators en proteaseremmers om te voorkomen dat het eiwit wordt beschadigd na het loslaten van de beschermende omgeving van de cel .
lyse Voorwaarden
Performing lysis onder ijskoude omstandigheden voorkomt schade aan het eiwit van belang .

Lysis buffer wordt meestal gebruikt ijskoude en het afbraakproces mag doorgaan onder koude omstandigheden . De oplossing wordt zachtjes geschud om gelijkmatige spreiding van de cellen en lysis stimuleren. Na ongeveer 5 tot 10 minuten , wordt de lysis oplossing gewoonlijk geneutraliseerd verdere activiteit. Deze maatregelen verminderen schade aan het eiwit verminderen hoeveelheid vreemde puin geproduceerd die later moet worden verwijderd .
Andere Lysis methoden
mechanische kracht kan ook worden gebruikt om cellen te lyseren .

Hoewel chemische lysis is de zachtste en meest gebruikte zwaardere mechanische werkwijzen voor het lyseren van cellen kunnen worden gebruikt in sommige gevallen . Deze omvatten sonicatie , herhaalde vries - dooi cycli en homogenation , die een maischproces . Raadpleeg de technische literatuur om de meest geschikte methode voor uw specifieke geval te vinden.