TPA zuiveringsprotocollen

Weefsel plasminogeen activator of TPA is een soort serineprotease , die eiwitten kan bloedstolsels vernietigen . TPA is in de cellen die intern omvatten de bloedvaten . TPA protocollen deel van de farmaceutische en medische onderzoek slagen , en hart-en longziekten , zoals longembolie en myocardinfarct . TPA zuivering verwijst naar de isolatie van deze eiwitten van andere moleculen door een aantal processen , zoals chromatografie en elektroforese . Zuivering van TPA van Hog ​​Kidney

Dit protocol wordt gebruikt voor onderzoek fibrinolyse , het proces van het breken van het product van coagulatie genoemd fibrine , naar de vorming van tumoren . Technici extraheren TPA uit - aceton gedroogde varken nier met kalium acetaat buffer bij pH 4.2 . Vervolgens voegen ze ammoniumsulfaat naar cel neerslag veroorzaken . Zij voegen n - butyl - sepharose de monsters , die vervolgens worden geanalyseerd op een chromatographer . Concanavaline A wordt ook toegevoegd en chromatograph.y aan verschillende eiwitten te scheiden wordt uitgevoerd .
Zuivering van TPA uit Chinese hamster ovarium en E. coli cellen

Eiwitzuiverheid is een belangrijke factor in het succes van biologische experimenten . Gezuiverd TPA is ook commercieel verkrijgbaar , wat tijd scheelt en het vermijden van het risico van het experiment in gevaar te brengen als gevolg van slecht gezuiverde oplossing . Dit protocol omvat de zuiveringsprocessen van TPA in zoogdieren en bacteriële cellen . Technici neerslaan celmonsters , filtreren hen en affiniteit en gelchromatografie analyses uit te voeren . Later , ze analyseren en vergelijken de resultaten , voorafgaand aan de commerciële productie.
Expressie van Active Human TPA in E. coli

Geklaarde cellysaten worden toegevoegd aan lysine - Sepharose kolom in een chromatographer geanalyseerd en gewassen met een oplossing van natrium chloor . Een ander monster wordt op een tweede chromatografiekolom met eiwitten die bindt aan TPA met een zeer hoge affiniteit geladen . Een monster van de tweede kolom wordt gemengd met een oplossing van zink - sepharose . Het resulterende eiwit toont meer dan 90 procent zuiverheid, volgens het tijdschrift ' Applied and Environmental Microbiology . "