Tissue Culture Tips

Weefselcultuur is de propagatie van cellen in een vloeibaar groeimedium in het laboratorium voor verschillende wetenschappelijke doeleinden . Zo worden weefselculturen in diagnose van genetische ziekten , als een medium voor het kweken van intracellulaire pathogenen zoals bacteriën of virussen of onderzoek in de cellen zelf . Weefselcultuurcellen

Sommige cellen zich aan de onderkant van petrischaaltjes of blijven gesuspendeerd in de vloeistof . Cellen kunnen van plantaardige of dierlijke oorsprong . Cellen die in weefselkweken kan zijn primaire cellen , wat betekent dat ze werden rechtstreeks geoogst van een organisme , of van een cellijn die in de cultuur heeft behouden . Cellijnen zijn vaak kankercellen , en dat moet worden overwogen bij de planning of de interpretatie van experimenten .
Behandel Cellen voorzichtig

hechtende cellen worden verwijderd uit hun petrischaaltje voor passage door schrapen of met een protease , algemeen trypsine en EDTA . Schrapen doodt vele cellen en mag alleen worden gebruikt bij het opstellen van cellysaten ( vloeibare preparaten van celinhoud voor analyse ) of wanneer trypsine /EDTA moet absoluut worden vermeden .

Trypsinizing verwijdert niet alleen de eiwitten die cellen zich aan het gerecht maar de meeste andere eiwitten op het membraan van de cel ook . Cellen bal omhoog en neem de tijd , meestal 's nachts , om een ​​band met het gerecht te herstellen . Het toevoegen van een minimale hoeveelheid trypsine - ongeveer 1 ml voor 25cm2 kolf - schommelen de kolf gedurende vijf seconden of minder het bekleden van de monolaag en afgieten of opzuigen overtollige trypsine zal de hoeveelheid trypsine waarop de monolaag wordt blootgesteld te verminderen . Laat de cellen rusten in de incubator gedurende trypsine .

Nadat de cellen glijden de bodem van de schaal , media toevoegen serum en zuig het lysaat op en neer pipet zachtjes . Laat een beetje media in het gerecht te blijven als je pipet op en neer meerdere malen om uiteen te vallen bosjes en een nog schorsing .

Niet bellen zuigen in de pipet . Ook niet krachtig mengen of vortex de celsuspensie ; de cellen zijn erg kwetsbaar in deze gebald - up staat .
om warmte te inactiveren of niet te inactiveren Verhit

Wanneer celkweek technieken waren in de kinderschoenen , foetaal runderserum ( FBS ) werd bekend complement eiwitten die het immuunsysteem eiwitten die lyseren cellen bevatten . Complementproteïnen zijn niet gewenst in celcultuur . - Warmte inactiveren FBS bij 56 graden Celsius gedurende 30 minuten zal complement eiwitten inactiveren . Voorverwarmen FBS tot 37 graden C is ook genoeg om complement eiwitten inactiveren .

In de vroege dagen , warmte inactiveren FBS doodde ook mycoplasma en andere verontreinigingen . Op het moment , werd filter sterilisatie uitgevoerd met 0.45um filters . Vandaag , we filteren steriliseren FBS en media via 0.1um of zelfs 0.04um filters . Geen mycoplasma zal afschuw van dat

Dit laat ons de vraag of de inactivatie van warmte

Hitte -inactivatie degradeert alle componenten van de FBS - . . Zoals vitamines, aminozuren en groeifactoren - . eventueel onder de drempel voor sommige pietluttige cellijnen

Als u werkt met een langzaam groeiende of pietluttige cellijn , overweeg alleen filteren steriliseren uw FBS . Misschien vindt u dit verhoogt de robuustheid van je cellen .