Hoe te Agar platen Bereid

Moleculaire biologie en bacteriologie gebruiken agar platen tot cultuur micro-organismen zoals bacteriën voor experimenten. De agar is het middel dat stolling of gels, een vloeibaar voedingsmedium die door het micro-organisme om te overleven en te groeien. Eenmaal overgebracht naar een agarplaat, de bacteriën groeien in afzonderlijke kolonies (indien gekweekt bij lage concentraties) of uitstrijkjes (indien gekweekt bij hoge concentraties) en kan worden geoogst voor analyse. Biologen bereiden agar platen, zoals het proces vereist toegang tot laboratorium-grade reagentia en machines en een goed begrip van de moleculaire biologie en steriele technieken. Wat je nodig hebt
Handschoenen
Labjas
Gezichtsmasker
bunsenbrander
laminaire stroming kap
steriele petrischaaltjes
10g Bacto-trypton
5g gistextract
15g agarose
1 ml 1N NaOH
steriel gedestilleerd water
Glazen fles
autoclaaf tape
Autoclaaf
supplementen, bijv. antibiotica, zoals ampicilline
Toon Meer Aanwijzingen
1

Trek van aangepaste veiligheidsuitrusting, inclusief handschoenen, een laboratoriumjas en een gezichtsmasker en ontsmet alle oppervlakken. Werken naast een Bunsen brander of, bij voorkeur, in een steriele laminaire stroming kap. Dit voorkomt dat verontreinigingen in de lucht van het vallen in de agar. Kopen van 2

Verwijder de stapel petrischaaltjes uit hun verpakking, maar sparen voor het opnieuw inpakken van de agar platen. Label het buitenoppervlak van de schaal (niet het deksel) van het type agar en de datum van vervaardiging. Leg de platen uit als een enkele laag met de verwijderde om het schenken van de agar makkelijker deksels.
3

Meng de Bacto-trypton, gistextract en agarose elkaar en voeg dan de natriumhydroxide (NaOH) oplossing. Steriel gedestilleerd water toe te voegen aan 1L van voedingsbodems te verkrijgen. Breng deze oplossing over een glazen fles met minstens 1.5L volume. Inhangen op het deksel van de fles en het etiket van de datum van vervaardiging en de naam van de media. Plak een strook autoclaaf tape op de fles en autoclaaf het voor 25 minuten. Laat de fles cool om niet lager dan 45 graden Celsius (of het zal verharden voortijdig), maar niet hoger dan 50 graden Celsius. U kunt flessen gekoeld en gestold agar bewaren bij 4 graden Celsius en vervolgens warm tot vloeibaar. Indien nodig voor uw specifieke experiment of stam van bacteriën, voeg de juiste soort en hoeveelheid supplement zoals antibiotica. Als de media is te heet, zal de supplementen worden vernietigd, dus zorgvuldig te controleren de temperatuur van de media voordat u verder gaat.
4

Giet een voldoende volume van agar aan halve vul de schaal, terwijl de agar is nog warm en vloeibaar. Ervoor te zorgen dat het oppervlak volledig bedekt is. Giet een te hoog bedrag of laat de agar de bovenkant van de schotel te bereiken. Houd de platen in een steriele atmosfeer doordat de bunsenbrander of een laminaire stroming kap om continu draaien. Laat de platen op te zetten en dan in de plaats van de deksels.
5

Droog de agar platen gedurende ongeveer 30 minuten tot een uur in een oven ingesteld niet hoger dan 37 graden Celsius. U kunt ze achterlaten in de laminaire stroming kap gedurende drie minuten of op een ontsmet laboratorium bank in een gebied met weinig verkeer, dat is niet tochtig voor een dag of twee. Het drogen van de platen stopt met bacteriële oplossing die op het agar oppervlak van gewoon verdunnen en te glijden in plaats van het vormen van kolonies die zich aan de agar.
6

bewaart de platen voorzichtig in het donker bij 4 graden Celsius. Stapel de gedroogde agar platen met hun bodems omhoog zodat u duidelijk de labels en micro-organismen en puin te voorkomen dat op het agar oppervlak en vervuilen ze. Zet de gerechten terug in hun verpakking, dek af met aluminiumfolie en tape de verpakking dicht. Label de verpakte platen met de inhoud en de datum van de bereiding. U kunt de platen te slaan voor maximaal twee maanden en dienen zich ervan te ontdoen na dat.