HPLC Techniek

HPLC staat voor hoge - prestatie vloeistofchromatografie , een standaard kwalitatieve en kwantitatieve analyse procedure die wordt gebruikt in de analytische laboratoria . HPLC betrouwbaar en herhaalbaar , waarvan de voorkeurstechniek voor het scheiden , identificeren en kwantificeren van moleculen uit complexe mengsels van zowel chemische als biologische componenten maakt . Vier Componenten

De HPLC- methode bestaat uit vier belangrijke componenten . Ten eerste , het oplosmiddeltoevoersysteem ( mobiele fase ) , die de monsters verricht door de kolom , is belangrijk , omdat de polariteit van invloed op het vermogen van het systeem om de moleculen te scheiden . De chromatografie is meestal een verticale glazen kolom die is gevuld met een adsorbens . Ten tweede , de adsorberende ( ook bekend als de stationaire fase , aangezien het niet verschuift ) is gewoonlijk silicagel of aluminiumoxide . Ten derde , het monsterintroductie bestaat uit een soort injectiepoort het monster introduceren te analyseren in het oplosmiddeltoevoersysteem . De vierde component is de detector .
Detectoren

Het type detector gebruikt, hangt af van het type van het monster de technici draait en wat moleculen ze proberen te isoleren . De criteria de technicus van het kiezen van een detector omvatten selectiviteit , signaal - ruisverhouding , detectielimiet , lineaire bereik , tijdconstante , drift en celvolume . Algemeen gebruikte detectoren omvatten ultraviolet - zichtbare detectoren, massaspectrometers , brekingsindexen , fluorescentie detectoren of verdampende lichtverstrooiingsdetector apparaten .
Procedure

Schakel de detector , de pompen ( die gebruikt worden om druk aan de mobiele fase bewegen door de stationaire fase toevoegen) , en de computer die het opnemen en chromatogram . Kies de gewenste programma's om de gewenste gegevens te verzamelen . Breng het monster in de injectie -poort . Houd een oogje op de druk. Elk type kolom een ​​maximale druk ; Niet te overschrijden of scheiding zal optreden . Print het chromatogram en de resultaten te analyseren . Aan het einde van elke run , is het belangrijk om het spoelen van de injectie -poort , om afzettingen te voorkomen , die verstoppingen kunnen creëren.
Soorten

Hydrofiel interactie chromatografie gebruikt een gebonden polaire stationaire fase en een niet-polair , met water mengbaar loopvloeistof moleculen op basis polariteit scheiden. Deze techniek heeft de mogelijkheid om zuur, basisch en neutraal monsters gescheiden in een chromatogram.Normal fase chromatografie gebruikt een polaire stationaire fase en een niet-polair , niet-waterige mobiele fase structurele isomeren ( moleculen scheiden met dezelfde molecuulformule die atomen zijn gebonden in verschillende manieren ) . omgekeerde fase chromatografie is de meest gebruikte vorm van HPLC . Het gebruikt een polaire stationaire fase en een waterige enigszins polaire mobiele fase . Deze methode wordt algemeen gebruikt door farmaceutische bedrijven om geneesmiddelen te kwalificeren voor release.Size uitsluitingschromatografie scheidt moleculen op basis van hun grootte en kan ook bepalen de structuur van proteins.Ion uitwisselingschromatografie is gebaseerd op de aantrekkingskracht tussen ionen in opgeloste en de geladen plaatsen
gebonden aan de stationaire fase .
Gebruik

HPLC is nuttig in een verscheidenheid van toepassingen . Het kan gebruikt farmaceutische materialen , die nuttig is bij het ​​onderzoek naar nieuwe geneesmiddelen en zuiveren bestaande analyseren . Het wordt ook gebruikt om biologische vloeistoffen , pesticiden , explosieven en andere materialen te analyseren . Hoewel het een populaire techniek voor biomedische , biochemische en farmaceutisch onderzoek , wordt het ook gebruikt in de cosmetica , voedsel , milieu- en energie-industrie .