MBP zuiveringsprotocollen

MBP of maltose bindend eiwit in de bacterie Escherichia coli , die deel uitmaakt van de darmflora van mensen en dieren . De zuivering van MBP omvat een reeks procedures om scheiden bestanddelen van de proteïne . In moleculaire biologie , MBP zuivering is een belangrijk proces voor de studie van de structuur en functie van dit eiwit . MBP zuivering protocollen omvatten MBP gefuseerde eiwitten zuivering , kleinschalige MBP - fusion en maltosebindingseiwit fusie tag zuivering . MBP gefuseerde eiwitten Zuivering

Tijdens dit protocol technici was 20 ml van het polymeer amylose hars met Atris oplossing bij pH 7,4 , natriumchloride , Mercaptoethanol ( ME ) en ethyleendiaminetetra-azijnzuur ( EDTA ) , volgens protocollen online . Celmonsters worden toegevoegd , gecentrifugeerd en gelelektroforese geanalyseerd . Monsters worden ook geanalyseerd in een chromatographer , waar technici elutie of observeren bestanddelen van de oplossing tijdens het passeren door de kolom chromatografie.
Small Scale MBP - fusie Eiwitzuivering

Volgens de Hebreeuwse Universiteit van Jeruzalem , biologen gebruiken het reagens isopropyl bD- 1 - thiogalactopyranoside ( IPTG ) , spin- celcultuur gedurende 10 minuten bij 8000 omwentelingen per minuut bij 39,2 graden Fahrenheit . Later , ze verwijderen bovenstaande vloeistof en meng koude PBS -buffer aan het monster , die is onderverdeeld in verschillende buizen en opnieuw gecentrifugeerd . Monsters worden vervolgens bewaard bij -112 graden Fahrenheit voor posterior analyse.
Maltosebindingseiwit Fusion Tag Purification

Affiniteit tags worden genetisch gemanipuleerde moleculen die werkzaam zijn in de moleculaire biologie eiwitten te detecteren en te zuiveren . Dit protocol is een complex geheel van procedures verdeeld in drie fasen , waarvan de bouw van polyhistidine eiwitmerker ( HisMBP ) omvatten ; een proefproject om de oplosbaarheid van het eiwit te evalueren ; en de grootschalige zuivering van MBP moleculen , volgens Nature Protocols . Afgezien van E.coli monsters , technici ampicilline , kanamycine , IPTG , anhydrotetracycline , glucose monohydraat , cellysisbuffer , DNA-polymerase , PCR-primers , Tris - acetaat - EDTA en ethidiumbromide .