Verschil tussen directe en indirecte ELISA

een enzymgekoppelde immunosorbent assay ( ELISA ) omvat de reactie van een antilichaam - enzym -complex met een antigeen of antilichaam onbeweeglijk gehouden aan een vast oppervlak . Bij incubatie van het geconjugeerde enzym met een geschikt substraat , wordt een product gevormd . De vorming van een product draagt ​​de aanwezigheid van het antigeen of antilichaam te detecteren en de kwantiteit geeft een maat voor de hoeveelheid antigeen - antilichaamreactie die plaatsvond . De ELISA-test kan worden uitgevoerd in twee vormen : directe en indirecte . Test Format

In de directe ELISA-test , een primair antilichaam wordt op de muren van een microtiterplaat gehouden . Als het monster vermoedelijk het antigeen wordt toegevoegd , er een antigeen - antilichaam reactie . Vervolgens wordt een enzym-gebonden secundair antilichaam dat kan reageren met het antigeen toegevoegd . Als antigeen in het monster aanwezig is , bindt het aan deze enzym-gebonden antilichaam. Wanneer een kleurloos substraat wordt toegevoegd , wanneer een kleur ontwikkelt, de aanwezigheid van antigeen . In de indirecte ELISA is antigeen op de wanden van de microtiterplaat gehouden . Indien een monster verdacht antilichamen bevat wordt toegevoegd , een antigeen - antilichaam- reactie optreedt . Vervolgens wordt een enzym-gebonden tweede antilichaam kan reageren met de ongebonden van het antilichaam toegevoegd . Wanneer de kleurloze substraat wordt toegevoegd , het leidt tot de ontwikkeling van de kleur als het gebruikte monster antistoffen bevat .
Gemakkelijk testen

Een breed scala van gelabelde secundaire antilichamen zijn commercieel beschikbaar . Bovendien is het mogelijk om meerdere primaire antilichamen maken in een bepaalde soort en hetzelfde secundaire antilichaam voor detectie. Dit maakt de indirecte ELISA eenvoudig uit te voeren . In de directe ELISA , de primaire antilichamen die specifiek bereid te reageren met het antigeen vermoed aanwezig in het monster te zijn . Dit maakt de directe ELISA nadelig in vergelijking met de indirecte test.
Snelheid van testen

De directe ELISA-test is snel in vergelijking met de indirecte testen omdat het heeft maar een antilichaam . De indirecte ELISA vereist een extra stap van incubatie met een tweede antilichaam tijdens de test procedure, die een vertraging in het behalen van resultaten veroorzaakt.
Gevoeligheid

De directe ELISA-test is minder gevoelig dan de indirecte vorm van de test omdat er minder signaalversterking . Daarnaast kan het etiket van het primaire antilichaam met een enzym zijn immonoreactivity profiel beïnvloeden . Bij de indirecte ELISA is het primaire antilichaam gelabeld en derhalve de immunoreactiviteit behouden . Daarnaast elke primaire antilichaam vele epitopen die binden met het secundaire antilichaam , dit maakt amplificatie van het signaal , waardoor de gevoeligheid verbetert de methode. Er is echter een kans kruisreactiviteit tussen het antigeen en het tweede antilichaam , waardoor een fout in de resultaten . Er is geen mogelijkheid in de directe ELISA-methode .