Competitieve bindingsbepaling Protocol

De competitieve bindingstest is een experiment dat de bindingscapaciteit van eiwitten of chemicaliën voor gespecialiseerde eiwitten die op een celoppervlak bepaalt genoemd receptoren . De methode wordt vaak gebruikt in medisch onderzoek , maar kan ook bepalen welke drugs binden aan receptoren en wijzigen receptoractiviteit , waardoor kan celgedrag veranderen . Cel Voorbereiding

Re - schorten cellen in ijskoude fosfaat gebufferde zoutoplossing ( PBS ) . Maatregel eiwitconcentratie gelijke eiwitniveaus bevestigen door een gespecialiseerde handel verkrijgbare eiwitanalyse .
Assay

toevoegen door radioactief gemerkt eiwit bekend te binden aan de receptor , de ligand , de cel of weefsel suspensie . Voeg de concurrent die het testgeneesmiddel of eiwit onder studie en incubeer de radioactieve ligand en de celsuspensie . Een reeks concentraties van het testgeneesmiddel worden onderzocht . Na incubatie , apart gebonden en ongebonden ligand en meet radioactiviteit .
Data-analyse

De gebruikelijke maatregel vast te stellen is de helft van de maximale concentratie die de receptor remt ook wel bekend als IC50 . Dit wordt berekend door het uitzetten van de concentratie op een logaritmische schaal op de X-as van een grafiek , terwijl de Y- as het percentage inhibitie a sigmoid curve , die een S - vorm worden geproduceerd . De IC50 is de 50 procent inhibitie punt , en de bijbehorende concentratie kan worden afgelezen uit de grafiek .