TPA Purification Protocols

Weefsel plasminogeen activator of TPA is een soort serineprotease dat eiwitten kunnen bloedstolsels vernietigen. TPA is in de cellen die intern dekken de bloedvaten. TPA protocollen maken deel uit van de farmaceutische en medische onderzoek slagen, en hart-en longziekten, zoals longembolie en myocardinfarct. TPA zuivering verwijst naar de isolatie van deze eiwitten van andere moleculen door een aantal processen, zoals chromatografie en elektroforese. Zuivering van TPA van Hog ​​Kidney

Dit protocol wordt gebruikt voor onderzoek fibrinolyse, het proces van het breken van het product coagulatie genoemd fibrine, naar de vorming van tumoren. Technici extraheren TPA uit aceton-gedroogde hog nier met kalium-acetaat buffer, op pH 4,2. Vervolgens voegen ze ammoniumsulfaat naar cel neerslaan te induceren. Zij voegen n-butyl-sepharose de monsters worden vervolgens geanalyseerd op een chromatographer. Concanavaline A wordt ook toegevoegd en chromatograph.y aan verschillende eiwitten scheiden wordt uitgevoerd.
Zuivering van TPA uit Chinese hamster ovarium en E. coli cellen

Eiwitzuiverheid
is een belangrijke factor in het succes van biologische experimenten. Gezuiverd TPA is ook commercieel verkrijgbaar, wat tijd bespaart en het vermijden van het risico van gevaar het experiment te wijten aan slecht gezuiverde oplossing. Dit protocol omvat de zuiveringsprocessen TPA in zoogdieren en bacteriële cellen. Technici neerslaan cel monsters, filtraat hen en voeren affiniteit en gelchromatografie analyse. Later, ze analyseren en vergelijken de resultaten, voorafgaand aan de commerciële productie.
Expressie van Active Human TPA in E. coli

Geklaarde cellysaten
worden toegevoegd aan een lysine - Sepharose kolom geanalyseerd in een chromatographer en gewassen met een oplossing van natrium chloor. Een ander monster wordt op een tweede chromatografiekolom met eiwitten die bindt aan TPA met een zeer hoge affiniteit geladen. Een monster van de tweede kolom wordt gemengd met een oplossing van zink-sepharose. Het resulterende eiwit geeft meer dan 90 procent zuiverheid, volgens het tijdschrift 'Applied and Environmental Microbiology. "