Retrovirale infectie protocollen

bevattende een RNA -genoom dat is ingekapseld in een capside en lipide envelop , retrovirussen bevatten polypeptideketens die helpen koppelen aan receptoren in de membranen van gastheercellen die ze infecteren . Dat erfelijke informatie meeste cellen wordt gecodeerd in het DNA , dat van retrovirussen is in RNA ; retrovirussen dragen ook het enzym reverse transcriptase , waardoor ze zich te houden aan de gastheer-DNA . Sommige protocollen worden gevolgd door laboratoria in de doelgerichte infectie van de cel DNA met deze virussen . Voorbereiden van het Laboratorium

Bepaalde laboratorium apparatuur en benodigdheden zijn nodig om te helpen bij het ​​proces van retrovirale infectie . Apparatuur omvat 1 pipet hulp , 1 pipet - man , 1 weefselkweek kap , 37 graden Celsius en 32 graden Celsius incubators , en een Eppendorf centrifuge . Leveringen omvatten weefselkweek platen , een wegwerp Pasteur pipet , gekwalificeerde retrovirale supernatant , filtergesteriliseerd polybreen en - filter gesteriliseerd protaminesulfaat .

Voorafgaand Voorbereiden van de Cel voor Infectie
voor infectie , moet doelcellen worden gesplitst in een weefselkweek plaat en overnacht geïncubeerd in een 37 graden Celsius incubator met vijf procent CO2. Het doel van de incubatietijd is naar cellen die 50 % confluent te creëren . Voorbereiding van de cellen vooraf moet voor worden gezorgd dat de cellen zijn geoptimaliseerd voor het infectieproces . De Nolan Lab van Stanford University raadt cel infectie altijd beginnen start door het infecteren van de NIH 3T3-cellen te helpen optimaliseren van de resultaten van de test .
De cellen te infecteren

Na de incubatieperiode voorbij onderzoekers moeten ervoor zorgen dat de cellen zowel gezonde en de juiste samenvloeiing . De weefselkweek kap, is de cellulaire stof afgezogen en virale supernatant wordt aangebracht op de cellen . Eenmaal aangebracht , moet de plaat worden zachtjes geschud en weer zodat het gelijkmatig wordt verdeeld . De cellen moeten dan spin geïnoculeerd door ze in de Eppendorf centrifuge en ze draaien bij 2500 rpm gedurende negentig minuten bij een temperatuur van 30 graden Celsius . Daarna moeten de cellen worden geïncubeerd bij 32 graden Celsius gedurende een tot twee dagen . Het virus wordt vervolgens vervangen door de uitgepakte cellen en geplaatst in de incubator om overal worden geanalyseerd van drie tot zeven dagen na de eerste infectie .