Cel invriesprotocol

Behoud cellen door bevriezing is essentieel voor onderzoek, diergeneeskunde en veeteelt , omdat het stelt cellen worden opgeslagen voor langere tijd . De vriesmethode gekozen moet echter verminderen of beschadiging van de cel voorkomen . De cryopreservatie middel en werkwijze kan afhangen van het type cel. Voorbereiding

cellen moeten worden bevroren als ze gezond en actief groeiende met een levensvatbaarheid 90 procent . Zorg moet worden genomen over het omgaan met en hoge snelheid centrifugeren en krachtig pipetteren of afzuiging moet worden vermeden om de levensvatbaarheid te behouden en voorkomen celbeschadiging .
Cryoprotection

Een cryoprotection agent gebruikt als vervanging voor intracellulair water . Het middel voorkomt ijskristallen en dehydratie in de cellen . Gesteriliseerde glycerol en gesteriliseerd dimethylsulfoxide worden vaak gebruikt in een concentratie van 5 procent tot 15 procent ( volume per volume ) verdund in beide foetaal kalfsserum of kweekmedium , afhankelijk van celtype .
Vorst en opslag

Cellen in het ijskoude mengsel moet langzaam worden gekoeld. Als een programmeerbare vriezer beschikbaar is , kan cryovials verpakt in weefsel of geplaatst in polystyreen , waarbij het ​​vriesproces kan vertragen . De cellen moeten bij min 80 graden Celsius worden bewaard gedurende 24 uur en vervolgens overgebracht naar vloeibare stikstof voor langdurige opslag .
Ontdooien

bevroren cellen moet snel worden ontdooid . Een waterbad bij 37 ° C worden gebruikt . Voorzichtigheid is geboden met cellen opgeslagen in vloeibare stikstof , echter, zoals vloeibare stikstof de flesjes kunt invoeren en kan ontploffen bij ontdooien . De bevriezing mengsel moet worden verdund in groeimedia . Levensvatbaarheid van de cellen moeten worden beoordeeld met de kleurstof trypaanblauw en de cellen gekweekt als normaal .