PBMC Protocol

Gecryopreserveerde perifeer bloed mononucleaire cellen ( PBMC ) zijn een frequente bron van monsters voor onderzoek dat immuuntherapie en reacties op vaccins omvat . Sommige protocollen zijn beperkt tot isolatie en bevriezen fasen van het proces , anderen zijn ontdooien procedures . Isolatie Procedure en invriezen

Een commerciële verbinding om scheiding te bevorderen wordt geplaatst in elke 50 ml centrifugebuis en worden de buizen gedurende dertig seconden gecentrifugeerd . Kappen van bloed buizen worden besproeid met alcohol vóór de opening , dan anticoagulantia behandeld volledig bloed wordt vervolgens via een pipet in de centrifuge buizen. De plasma laag van het bloed wordt opgezogen met een pipet .
Freezing

De cellen uit de vorige stap wordt vervolgens met zoutoplossing driemaal gecentrifugeerd . Na een aantal cellen , zal de specimens vervolgens gecentrifugeerd worden gesuspendeerd in bevriezing medium . Exemplaren in invriesmedium zijn volgende verdeeld cryovials in een ml bedragen . Flesjes worden gedurende de nacht opgeslagen in een

-70 º C vriezer en verhuisde naar de lange - termijn opslag in vloeibare stikstof de volgende dag.
Safe Ontdooien

Cryobuizen worden overgebracht van vloeibare stikstof om een 37 ° C waterbad en specimen mag een ontdooien tot twee minuten . Een warm transport media wordt toegevoegd aan elk flesje . Verdunde celsuspensie wordt gedurende zeven minuten gecentrifugeerd . Het aantal en de levensvatbaarheid van de cellen gecontroleerd , Als cellen nodig te concentreren , worden monsters gecentrifugeerd zeven minuten. Het monster wordt verdund tot werkende oplossing en een rusttijd van twaalf tot achttien uur voor het begin van het onderzoek in het protocol.