Werkwijzen voor het meten van NADPH - oxidase

Het enzym NADPH oxidase is geïdentificeerd als een producent van reactieve zuurstofsoorten tijdens processen zoals de groei van vasculaire gladde spiercellen . Deze reactieve species zijn gekoppeld aan een aantal ziekten zoals hypertensie , diabetes , kanker en ontsteking , methodes voor de activiteit van dit enzym is essentieel voor mogelijke behandeling ontwikkelen . NADPH oxidase

NADPH oxidase behoort tot een familie van enzymen die helpen met elektron -overdracht tussen NADPH en zuurstof . Echter , NADPH oxidase heeft het unieke vermogen van de productie van reactieve zuurstofsoorten deze reactie , vergeleken met andere familieleden waarin reactieve zuurstof species gegenereerd via andere middelen . Een multimeer eiwitcomplex , NADPH oxidase uit het membraangebonden flavocytochrome B558 , die wordt gebruikt als een meting merker .
Reactive oxygen species ( ROS ) generatie

de belangrijkste bron van ROS , met name waterstofperoxide , NADPH oxidase produceert kleine maar consistente hoeveelheden via de isovorm uitgedrukt in bloedvaten , die betrokken zijn bij het signaleren van processen . Deze consistente productie kan uiteindelijk overweldigen het natuurlijke antioxidant systeem, waardoor een verlies van beschermende stoffen zoals stikstofmonoxide , en het genereren van nog krachtiger ROS .
Chemoluminescentiemethode

chemiluminescentie voor uiterst gevoelige automatische meting van NADPH -oxidase activiteit in een reeks concentraties . Tijdens deze werkwijze wordt NADPH substraat toegevoegd aan een weefsel monster dat NADPH oxidase . Na reactie wordt ROS gegenereerd en reageert met de verbinding lucigenine een chemilluminescent effect , gemeten produceren . Luminescentie is recht evenredig met NADPH -oxidase activiteit , zoals het enzym bepaalt de snelheid van de reactie .
Kinetische Analyse via flowcytometrie

deze werkwijze weefselmonsters geanalyseerd via flowcytometrie . Beenmerg wordt gescheiden van het monster met Hanks ' gebalanceerde zoutoplossing . Specifieke vlekken en de opsporing van antilichamen worden toegevoegd aan het monster in polystyreen buizen. Het monster wordt vervolgens geïncubeerd , gewassen met Hanks ' gebalanceerde zoutoplossing , gelabeld met moleculaire sondes en bereid van flowcytometrie . Controlebuizen zijn ook gemaakt voor vergelijking en de flowcytometer kalibreren . De machine wordt dan liep en metingen opgenomen .