De TMRE Protocol

tetramethylrhodamine ethyl (TMRE) is een "langzame, lipofiele, kationische fluorescente kleurstof reditribution" gebruikt in de MitoPT ™ TMRE /TMRM mitochondriaal Membraanpotentiaal Assessment Kit, vervaardigd door Immunochemistry Technologies, LLC. Het proces kan worden een transmembraan elektrische potentiaal gradiënt in cellen bekijken. Voorbereiden van de Assay

Het protocol is eenvoudig te volgen, en duurt ongeveer 20 minuten te verwerken bij 37 graden Celsius. De levende cellen die in de assay kan tussen enkele uren tot enkele dagen te bereiden voor gebruik. De controle cellen kan enkele uren duren voor te bereiden, omdat ze moeten worden aangezet tot apoptose ondergaan.
Protocol Deel 1

Cultuur cellen
tot een dichtheid optimaal is voor apoptose of oxidatieve stress inductie, volgens uw specifieke inductie-protocol, maar niet meer dan 10 (6) cellen /ml.
Protocol Deel 2

Op hetzelfde tijd, cultuur een niet-geïnduceerde negatieve controle cel populatie (bij dezelfde dichtheid als de geïnduceerde bevolking.
Protocol Deel 3

induceren apoptose of opzet depolariseren de mitochondriën volgende uw gewenste protocol.
Protocol Deel 4

Bereid 1X Assay /Wash Buffer.
Protocol Parts 5-8

Bereid de 1 mM of 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM voorraad. Voor Protocol Deel 6, bereiden een 1:100 verdunning van de 1 mM, of een 1:20 verdunning van de 0,2 mM MitoPT ™ TMRE /TMRM oplossing voor stekelige in celcultuur monsters.

Voor Protocol deel 7, vlek cellen met behulp van een uiteindelijke 20-200 nM concentratie van MitoPT ™ TMRE /TMRM oplossing.

Protocol deel 8, analyseert de gegevens.