Hechtende cellen Protocol

Cellen in cultuur of een vorm in suspensie gekweekt, zoals bloedcellen of cellen zoals fibroblasten die een oppervlak zij kunnen toetreden. Sommige oppervlakken coating in verschillende extracellulaire matrices afhankelijk van celtype en studie. Alle celkweken moet ondergaan zijn aseptische omstandigheden. Optimale omgeving

De meeste celtypen kunnen worden gekweekt in Dulbecco's gemodificeerd Eagle's medium (DMEM) of Roswell Park Memorial Institute (RPMI) met de toevoeging van 10 procent foetaal kalfserum, 2 milimoles van de aminozuur glutamine en antibiotica, bijvoorbeeld, 100 eenheden penicilline en 0,1 mg per ml streptomycine. Cellen worden onderhouden in hun media in een bevochtigde incubator bij 37 graden Celsius en 5 procent kooldioxide.
Splitsen

Cellen
moet dagelijks worden gecontroleerd op infecties, de dood of de groei . Zodra de weefselkweek kolf is 80 procent bedekt met cellen, moeten de cellen worden verdeeld om de gezondheid van de cellen en de log fase van groei. Media worden verwijderd en de cellen gewassen in fosfaatgebufferde zoutoplossing. Hechtende cellen vereisen de toevoeging van trypsine en ethyleendiaminetetraazijnzuur (EDTA) bij celadhesie eiwitten te verwijderen. Gentle roeren dient de cellen te verwijderen. Media moet worden toegevoegd aan de trypsine /EDTA-oplossing geneutraliseerd.
Steekenting

De verdunde cellen en tryspin /EDTA oplossing wordt gecentrifugeerd om pellet en wassen de cellen. De cellen worden geresuspendeerd in media verdund en opnieuw uitgeplaat in nieuwe flessen. Elke keer dat de cellen zijn de cellen passage nummer gesplitst wordt met een verhoogd.
Media Change

Media
moet tweemaal per week worden vervangen door het verwijderen van de oude media en het vervangen met nieuw, verwarmd media.