Protocollen voor Hoechst kleuring

De Hoechst vlekken zijn fluorescerende kleurstoffen worden gebruikt voor het etiketteren van DNA en RNA door fluorescentie microscopie en flowcytometrie technieken. Hoechst 33258 en Hoechst 33342 zijn de meest gebruikte van deze vlekken. Zij hebben het vermogen om te binden aan DNA-moleculen, waardoor de kernen en mitochondria onder ultraviolet licht fluorescerende weergegeven. Protocollen voor Hoechst kleuring zijn gangbare praktijk in biotechnologische en genetica laboratoria, en bevatten celkleuring technieken met behulp van zowel Hoechst 33258 en Hoechst 33342. Hoechst 33342 HSC Staining en stamcel Purification Protocol

Dit protocol wordt gebruikt om cellen van muizen beenmerg vlek. Technici bereiden beenmerg monster met HBSS + zoutoplossing, HEPES buffer en foetaal kalf serum. Spinnen zij de oplossing en aan een voorverwarmde DMEM medium. Hoechst vlek wordt dan toegevoegd. De oplossing wordt in een 98,6 graden Fahrenheit waterbad gedurende precies 90 minuten, meldt de afdeling Immunologie aan de University of Pittsburgh. DNA-segmenten verschijnen fluorescerend onder een cytometer.
Hoechst 33342 DNA kleuring

Tijdens dit protocol, technici geschorst Hoechst 33342 vlek in gedestilleerd water, voeg 2 procent foetaal kalf serum aan het celmonster, waarbij de pH op 7,2 met behulp van een bufferoplossing. Cellen worden vervolgens geïncubeerd bij 98,6 graden F voor een uur, en meteen geanalyseerd met een apparaat genaamd cytometer.

Stained DNA
is dan zichtbaar en fluorescerend, volgens de Universiteit van Michigan Health System.


DNA detectie Met behulp van de DNA-bindende Fluorochroom Hoechst 33258

Deze protocollen gebruikt een apparaat genaamd spectrofotometer om DNA-en RNA-segmenten te analyseren. Technici gebruiken Hoechst 33258 werkende oplossing en kalf thymus DNA-monsters. Ze maken ook een gescheiden oplossing met behulp van de DNA-monster en een chemische stof genaamd ethidiumbromide. Later, zij het celkleuring resultaten te vergelijken in beide media, met behulp van een spectrofotometer, volgens Current Protocols in Cytometry.