Retrovirale infectie Protocols

bevattende een RNA-genoom dat is ingekapseld in een capside en lipide envelop, retrovirussen bevatten polypeptideketens waarmee koppelen aan receptoren in de membranen van gastheercellen die ze infecteren. Terwijl de meeste cellen 'erfelijke informatie is gecodeerd in DNA, dat van retrovirussen is opgenomen in RNA, retrovirussen dragen ook het enzym reverse transcriptase, waardoor ze zich aan de gastheer-DNA. Sommige protocollen worden gevolgd door laboratoria in de doelgerichte infectie van de cel DNA met deze virussen. Voorbereiden van het Laboratorium

Bepaalde laboratoriumapparatuur
en leveringen nodig om te helpen bij het proces van retrovirale infectie zijn. Apparatuur omvat 1 pipet hulp, 1 pipet-man, 1 weefselkweek kap, 37-graden Celsius en 32 graden Celsius incubators, en een Eppendorf centrifuge. Leveringen omvatten weefselkweek platen, een wegwerp Pasteur pipet, gekwalificeerde retrovirale supernatant, filter-gesteriliseerd polybreen en filter-gesteriliseerd protaminesulfaat.
Voorbereiden van de Cel voor Infectie

Prior voor infecties, moet doelcellen worden gesplitst in een weefselkweek plaat en overnacht geïncubeerd in een 37-graden Celsius incubator met vijf procent CO2. Het doel van de incubatietijd van cellen die 50% confluent maken. De voorbereiding van de cellen vooraf moet worden gewaarborgd dat de cellen worden geoptimaliseerd voor het infectieproces. De Nolan Lab van Stanford University raadt cel infectie begint altijd start door het infecteren van de NIH 3T3-cellen te helpen bij het optimaliseren van de resultaten van de test.
De cellen te infecteren

Na de incubatietijd voorbij is, moeten onderzoekers ervoor zorgen dat de cellen zijn zowel gezond en van de juiste samenloop. Met de weefselkweek kap, is de cellulaire stof afgezogen en virale supernatant wordt aangebracht op de cellen. Eenmaal aangebracht, de plaat worden zachtjes heen en weer geschud zodat het gelijkmatig is verdeeld. Cellen moeten dan spin-geïnoculeerd door ze in de Eppendorf centrifuge en spinnen ze op 2500 rpm gedurende negentig minuten bij een temperatuur van 30 graden Celsius. Daarna moeten de cellen worden geïncubeerd bij 32 graden Celsius gedurende 1-2 dagen. Het virus wordt vervolgens vervangen door de cellen gehaald en geplaatst in de incubator te analyseren overal van drie tot zeven dagen na de eerste infectie.