Werkwijzen voor het meten van NADPH-oxidase

Het enzym NADPH oxidase wordt geïdentificeerd als een producent van reactieve zuurstofsoorten tijdens processen zoals de groei van vasculaire gladde spiercellen. Deze reactieve species zijn gekoppeld aan een aantal ziekten zoals hypertensie, diabetes, kanker en ontsteking, methodes voor activiteit van dit enzym is essentieel voor mogelijke ontwikkelingsbehandeling. NADPH oxidase

NADPH oxidase
behoort tot een familie van enzymen die helpen met elektronenoverdracht tussen NADPH en zuurstof. Echter, NADPH oxidase heeft het unieke vermogen van de productie van reactieve zuurstofsoorten deze reactie, vergeleken met andere familieleden waarin reactieve zuurstof species wordt gegenereerd via andere middelen. Een multimeer eiwitcomplex NADPH oxidase uit het membraangebonden flavocytochrome B558, die wordt gebruikt als een meting marker.
Reactieve zuurstof (ROS) Generation

de belangrijkste bron van ROS, met name waterstofperoxide, NADPH oxidase produceert kleine maar consistente hoeveelheden via haar isovorm uitgedrukt in bloedvaten, die betrokken zijn bij het signaleren processen. Deze consistente productie kan uiteindelijk overweldigen het natuurlijke antioxidant systeem, waardoor een verlies van beschermende stoffen zoals stikstofmonoxide, en het genereren van nog krachtiger ROS.
Chemoluminescentiemethode

chemiluminescentie> voor uiterst gevoelige, geautomatiseerde meting van NADPH-oxidase activiteit in een reeks concentraties. Tijdens deze werkwijze wordt NADPH substraat toegevoegd aan een weefsel monster dat NADPH oxidase. Na reactie wordt ROS geproduceerd en reageert met de verbinding lucigenine een chemilluminescent effect, gemeten produceren. Luminescentie is recht evenredig met NADPH-oxidase activiteit, zoals het enzym bepaalt de snelheid van de reactie.
Kinetic Assay via flowcytometrie

deze werkwijze weefselmonsters geanalyseerd via flowcytometrie. Beenmerg wordt gescheiden van het monster met Hanks 'Balanced Salt Solution. Specifieke vlekken en opsporing van antilichamen worden toegevoegd aan het monster in polystyreen buizen. Het monster wordt vervolgens geïncubeerd, gewassen met Hanks 'gebalanceerde zoutoplossing, gelabeld met moleculaire probes en bereid uit flowcytometrie. Controlebuizen worden ook ter vergelijking en de flowcytometer kalibreren. De machine wordt dan liep en metingen geregistreerd.