Biotinylering Protocols

Biotinylatie is het proces waarbij biotine of biotine, een eiwit of andere moleculen. Deze wetenschappelijke procedure wordt meestal gebruikt in de biotechnologie en moleculaire biologie onderzoek met DNA, eiwitten en antigenen, die zijn moleculen het lichaam het immuunsysteem herkennen als indringers. Biotinylering protocollen omvatten de biotinylering van antilichamen en peptiden, alsook celoppervlak biotinylering. Biotinylering van antilichamen

biotine koppelen antilichamen eiwitten als een antigeen in het lichaam, technici natriumbicarbonaat (NaHC03) bij pH 9, dimethylsulfoxyde (DMSO);

NHS
-biotine en een zoutoplossing stof genaamd PBS. Monsters worden gemengd met natriumbicarbonaat, dat later wordt toegevoegd aan NHS-biotine in DMSO. De oplossing wordt vervolgens de geanalyseerde antilichamen toegevoegd en geïncubeerd op een apparaat genaamd een rotator gedurende vier uur bij kamertemperatuur of overnacht bij 39,2 graden Fahrenheit. Ten slotte wordt de oplossing verdund met PBS.
Celoppervlak Biotinylering

het celoppervlak biotinylering protocol, technici weefselkweek, fosfaat-gebufferde zoutoplossing (PBS) en pH 7,4 en sulfosuccinimidyl-2-(biotinamido) ethyl-1 ,3-dithiopropionaat bufferoplossing in evenwicht zuurgraad die aminogroepen en Tris-Cl, volgens Current Protocols in Protein science.The cellen gemengd met biotine en de bufferoplossing, gedecanteerd en gecentrifugeerd . Stevige inhoud en specifieke eiwitten worden later geanalyseerd op een gel elektroforese plaat.
Biotinylatie van peptiden

Om de biotinylatie van peptiden uit te voeren, het gebruikte reagens is NHS -SS Biotine, volgens Philip Shepherd in "monoklonale antilichamen: A Practical Approach." Peptiden zijn korte fragmenten van aminozuren, de moleculen die eiwitten en DNA vormen. In dit protocol wordt de commerciële oplossing NHS-SS biotine opgelost in water. Dan peptide monster toegevoegd, samen met natriumbicarbonaat om de zuurgraad of pH evenwicht. De oplossing wordt vervolgens geïncubeerd op ijs gedurende twee uur. Technici kunnen de steekproef waarnemen met of zonder de biotinemoleculen.