Hoe te meten Katalase Concentraties

Katalase is een biologische (organic ) katalysator. Dit enzym is een van de meest potente bekende katalysatoren en heeft gunstige effecten op het menselijk lichaam en is essentieel voor het leven . Catalase fungeert als een katalysator in het versnellen van de afbraak van waterstofperoxide . Waterstofperoxide is een metabolisch bijproduct dat is giftig voor de cellen als ze niet verwijderd . Catalase helpt bij de afbraak van waterstofperoxide in water en zuurstof . Catalase helpt ook bij oxiderende andere toxinen zoals fenolen , mierenzuur , formaldehyde en alcoholen . Wat je
Twee 110 ml chromogen nodig in fosfaatbuffer
300 pi substraat - 30 % waterstofperoxide
400 μL.HRP - mierikswortelperoxidase in fosfaatbuffer
60 ml fosfaat buffer
250 ml monster verdunningsmiddel oppervlakteactieve in fosfaatbuffer
Twee 30 ml substraat verdunner fosfaatbuffer
Twee 30 ml stopreagens - natriumazide
Twee flesjes 160 U /flacon standaard catalase
spectrofotometer
10 pi verstelbare pipetten
1 cm weglengte spectrofotometrische cuvetten
1,5 ml polypropyleen microbuisjes met dop Electronics Test tubes - 12x75 millimeter ( 2,5 ml elk ) op Timer
gedemineraliseerd water

Toon meer instructies
1

Bereid de voorraad van catalase dat u zal worden te meten door het toevoegen van 200 microliter ( pl ) gedeïoniseerd water aan de catalase concentraties in 50 milliliter ( ml ) injectieflacons . Het niveau van de catalese concentratie moet 160 eenheden per milliliter ( U /ml ) .
2

Voeg 30 ul van de verdunde catalase in buizen . Voeg 500 ul van het substraat ( waterstofperoxide - 10mm H2O2 ) in elke buis . Wees voorzichtig niet te spetteren de waterstofperoxide bij het werken met het.

Incubeer 3 elke individuele buis gedurende een minuut bij kamertemperatuur .
4

Voeg 500 & mu ; L van reagens om elke flacon . Cap elke flacon en meng door het flesje op en neer . Niet zwenk het mengsel , schud de flacon of roer het met een voorwerp .
5

Voeg 20 ul van elk reactiemengsel in de reageerbuizen . Voeg 2 ml van de HRP reagens in elke reageerbuis . Ook meng de oplossing door het omkeren van de reageerbuisjes enkele malen .
6

Incubeer de oplossing opnieuw, ditmaal voor 10 minuten bij kamertemperatuur .

Lees 7 de absorptie niveau van de oplossing met een spectrofotometer . De spectrofotometer maatregelen golflengtes van het licht om precies te bepalen welke stoffen aanwezig zijn en en welke concentraties zijn . Deze methode zal een nauwkeurige lezing van de catalase -concentraties . De gegevens zijn in de context van de interactie van catalase met waterstofperoxide , zoals in dit experiment , en zoals plaatsvindt nature in het menselijk lichaam .