PBMC Protocol

gecryopreserveerde perifeer bloed mononucleaire cellen (PBMC) zijn een frequente bron van specimens onderzoek dat immuuntherapie en reacties op vaccins omvat. Sommige protocollen zijn beperkt tot isolatie en invriezen fasen van het proces en andere hebben ontdooien procedures. Isolatie Procedure en invriezen

commerciële verbinding om scheiding te bevorderen wordt geplaatst in elk 50 ml centrifugebuis en de buizen gecentrifugeerd gedurende dertig seconden. Kappen van bloed buizen worden besproeid met alcohol alvorens te openen, wordt dan antistollingsmiddel behandelde volbloed vervolgens via pipet in de centrifuge buizen. De plasma laag van het bloed wordt geaspireerd met een pipet.
Freezing

cellen uit de vorige stap wordt dan gecentrifugeerd met zoutoplossing driemaal. Na een celgetal, de monsters worden gecentrifugeerd vervolgens gesuspendeerd in ijskoud medium. Exemplaren in bevriezing medium worden volgend verdeeld cryovials in een ml bedragen. Flesjes worden gedurende de nacht opgeslagen in een

-70 º C vriezer
en verhuisde naar langdurige opslag in vloeibare stikstof de volgende dag.
Safe Ontdooien

Cryobuizen worden van vloeibare stikstof tot een 37 ° C waterbad en specimen mag een tot twee minuten ontdooien. Een warme transportmedia wordt toegevoegd aan elk flesje. Verdunde celsuspensie wordt gecentrifugeerd gedurende zeven minuten. Het aantal en de levensvatbaarheid van de cellen worden gecontroleerd, als cellen moeten concentreren, zijn monsters gecentrifugeerd zeven minuten. Het monster wordt verdund tot werkende oplossing en rustte voor twaalf tot achttien uur voor het begin van het onderzoek in het opgegeven protocol

Referenties
  Biomed Central:. Protocol voor isolatie , Cryopreservation en ontdooien van PBMC
  Network for Pancreatic Organ Donors met Diabetes: Isolatie van perifere mononucleaire bloedcellen (PBMC)
Resources
  Los Almos National Labs: Antibody Test in PBMC
  Scientists 'Solutions: Isoleren van lymfocyten uit volbloed.