Verschil tussen directe en indirecte ELISA

Een enzym-linked immunosorbent assay (ELISA) omvat de reactie van een antilichaam-enzym complex met een antigeen of antilichaam onbeweeglijk gehouden op een vast oppervlak. Bij incubatie van het enzym geconjugeerd met een geschikt substraat, wordt een product gevormd. De vorming van een product draagt ​​de aanwezigheid van het antigeen of antilichaam te detecteren en de hoeveelheid verschaft een maat voor de hoeveelheid antigeen-antilichaamreactie die plaatsvond. De ELISA-test kan worden uitgevoerd in twee vormen: directe en indirecte. Test Format

In de directe ELISA-test, wordt een primair antilichaam gehouden op de muren van een microtiterplaat. Wanneer het monster verdacht bevatten antigeen wordt toegevoegd, er een antigeen-antilichaam reactie. Vervolgens wordt een enzym-gebonden secundair antilichaam dat kan reageren met het antigeen toegevoegd. Als antigeen in het monster, bindt het aan dit enzym-gekoppelde antilichaam. Wanneer een kleurloos substraat toegevoegd als een kleurontwikkeling, geeft de aanwezigheid van antigeen. In de indirecte ELISA antigeen wordt gehouden op de wanden van de microtiterplaat. Indien een monster verdacht antilichamen bevat wordt toegevoegd, een antigeen-antilichaam reactie optreedt. Vervolgens wordt een enzym-gebonden tweede antilichaam kan reageren met de ongebonden gebied van het antilichaam toegevoegd. Wanneer het kleurloze substraat wordt toegevoegd, het leidt tot de ontwikkeling van kleur als het monster wordt gebruikt bevat antilichamen.
Gemak van Testen

Een breed scala van gelabelde secundaire antilichamen zijn commercieel beschikbaar. Daarnaast is het mogelijk om verschillende primaire antilichamen te creëren op een bepaalde soort en hetzelfde secundair antilichaam voor detectie. Dit maakt de indirecte ELISA eenvoudig uit te voeren. In de directe ELISA, de primaire antilichamen specifiek worden bereid met de specifieke antigen verdacht in het monster te reageren. Dit maakt de directe ELISA nadelig in vergelijking met de indirecte testen.
Snelheid van Testen

De directe ELISA-test is snel in vergelijking met de indirecte testen omdat het heeft maar een antilichaam. De indirecte ELISA is een extra stap van incubatie met een tweede antilichaam tijdens de testprocedure, die een vertraging bij het verkrijgen van resultaten veroorzaakt.
Gevoeligheid

De directe ELISA-test is minder gevoelig dan de indirecte vorm van de test omdat er veel minder signaalversterking. Daarnaast kan de etikettering van de primaire antilichaam met een enzym zijn immonoreactivity profiel aantasten. Bij de indirecte ELISA is het primaire antilichaam niet gelabeld en daarom behoudt zijn immunoreactiviteit. Daarnaast elke primaire antilichaam vele epitopen die binden met het secundaire antilichaam, dit maakt amplificatie van het signaal, waardoor de gevoeligheid verbetert de methode. Er is een kans kruisreactiviteit tussen het antigeen en het tweede antilichaam, waardoor een fout in de resultaten. Er is geen mogelijkheid in de directe ELISA-methode.