Hechtende cellen Protocol

cellen in kweek ofwel een vorm gekweekt in suspensie , zoals bloedcellen of cellen zoals fibroblasten die een oppervlak waaraan zij kunnen hechten . Sommige oppervlakken coating verschillende extracellulaire matrices vereisen afhankelijk celtype en studie. Alle celkweken moeten worden uitgevoerd zijn aseptische omstandigheden . Optimale omgeving

De meeste celtypen kunnen worden gekweekt in gemodificeerd Eagle's medium van Dulbecco ( DMEM ) of Roswell Park Memorial Institute ( RPMI ) met de toevoeging van 10 procent foetaal kalfserum , 2 milimoles van de aminozuur glutamine en antibiotica , bijvoorbeeld 100 eenheden penicilline en 0,1 mg per ml streptomycine . Cellen worden onderhouden in hun media in een bevochtigde incubator bij 37 graden Celsius en 5 procent kooldioxide .
Splitting

cellen moeten dagelijks worden gecontroleerd op infecties , de dood of de groei . Zodra de weefselkweek kolf is 80 procent bedekt met cellen , moeten de cellen worden verdeeld om de gezondheid van de cellen en de log fase van groei. Medium verwijderd en de cellen worden gewassen in met fosfaat gebufferde zoutoplossing . Hechtende cellen vereisen de toevoeging van trypsine en ethyleendiaminetetraazijnzuur ( EDTA ) celadhesie eiwitten te verwijderen . Zacht schudden moet de cellen te verwijderen . Media moet worden toegevoegd aan het trypsine /EDTA-oplossing te neutraliseren.
Subkweken

De verdunde cellen en tryspin /EDTA-oplossing kan worden gecentrifugeerd om pellet en wassen de cellen . De cellen worden geresuspendeerd in media verdund en opnieuw uitgeplaat in nieuwe flessen . Elke keer dat de cellen worden gesplitst de cellen passage nummer wordt met een verhoogd.
Media Change

Media moet tweemaal per week worden gewijzigd door het verwijderen van de oude media en vervangen door nieuwe , verwarmde media .